軟下疳的診斷有以下要點：
1、發病前2~5天有不潔性交史。
2、有典型的臨牀表現和發病經過。男性的包皮內外，包皮繫帶及龜頭等處；女性的大、小陰脣、尿道口等部位有一處或多處潰瘍、有疼痛與觸痛。
3、有單側的腹股溝“橫痃”，有觸痛，形成潰瘍排膿。
4、如系不典型軟下疳，則需結合實驗室檢查才能做出診斷，常用方法有：
（1）直接塗片 杜克雷菌有特殊的菌體形態和排列方式，如果在塗片中找到這種典型形態的病菌，則有可能是該病。
（2）杜克雷菌的分離培養 此法可作爲診斷依據，是目前常用的方法。
5、鑑別診斷性檢查
（1）姬姆薩染色法 肉芽腫莢膜桿菌陰性，以除外腹股溝肉芽腫。
（2）暗視野檢查梅毒螺旋體陰性。
（3）梅毒的血清學試驗陰性，以除外梅毒。
除上述實驗室鑑別診斷外，從病損形態上也應注意與有關疾病相鑑別。
1、與梅毒的硬下疳相鑑別。軟下疳性質柔軟，膿性分泌物多，外觀污穢，有炎症反應表現爲紅腫熱痛，潰瘍邊緣不規則，具有潛蝕性，基本凹凸不平，可自體傳染;梅毒的硬下疳爲軟骨樣潰瘍，不痛，無分泌物，基底較硬，不能自體傳染。
2、與腹股溝淋巴肉芽腫相鑑別。腹股溝淋巴肉芽腫的潰瘍初爲單髮結節，觸之易出血，潰瘍基底爲肉紅色，污穢、有臭味，無疼痛。
3、與急性女陰潰瘍相鑑別。急性女陰潰瘍患者，可無性病接觸史，見於年輕與未婚婦女，易反覆發作，潰瘍分泌物塗片檢查可見粗枝大桿菌。
